制備液相色譜技術(shù)基于樣品在固定相和流動相之間的分配差異進(jìn)行分離。當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，由于不同組分在固定相和流動相中的溶解度、吸附力等特性不同，它們會以不同的速度在色譜柱中移動，從而實現(xiàn)分離，主要由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱、檢測系統(tǒng)和餾分收集器等組成。
根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。濕法裝柱是其中一種常用的裝柱方法，它可以迫使相對稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成，通常配備餾分收集器，用于自動收集分離后的餾分。這有助于提高收集效率和純度，并減少人工操作誤差。
制備液相色譜技術(shù)以其靈活多樣、應(yīng)用廣泛和可規(guī)模化生產(chǎn)的特點，在化學(xué)、制藥、生物技術(shù)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。通過掌握其基本原理、選擇合適的部件、優(yōu)化裝柱方法和流動相選擇以及有效使用餾分收集器，可以實現(xiàn)對目標(biāo)物質(zhì)的高效純化。
1.高效分離：利用色譜柱的分離能力，能夠有效地去除雜質(zhì)，得到高純度的目標(biāo)物質(zhì)。
2.靈活多樣：可以靈活地對待復(fù)雜樣品，如大分子、高極性物質(zhì)、天然產(chǎn)物、金屬離子等不同類別樣品進(jìn)行純化，具有高度可控性和復(fù)雜性分離性。
3.應(yīng)用廣泛：不僅適用于化學(xué)分析領(lǐng)域，還廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等領(lǐng)域。
4.可規(guī)模化生產(chǎn)：可以根據(jù)需要選擇不同規(guī)格的色譜柱和設(shè)備，實現(xiàn)從實驗室小樣到工業(yè)化生產(chǎn)的規(guī)模化純化。
制備液相色譜儀的測定步驟：
-根據(jù)樣品性質(zhì)和分析目的選擇合適的填料(如正相或反相填料)和色譜柱。
-準(zhǔn)備合適的流動相，通常是溶劑或溶液的混合物，并根據(jù)需要過濾、除氣。
-對樣品進(jìn)行預(yù)處理，如過濾、離心等，以去除懸浮物和大分子物質(zhì)。
-將選定的填料裝入色譜柱中，并確保柱填充均勻。
-用流動相沖洗色譜柱，直至柱內(nèi)無氣泡且達(dá)到平衡狀態(tài)。
-將經(jīng)過預(yù)處理的樣品通過進(jìn)樣器注入色譜柱中。
-根據(jù)化合物在固定相和流動相之間的相互作用力差異，實現(xiàn)化合物的分離。
-利用檢測器檢測分離出的化合物，并根據(jù)檢測結(jié)果進(jìn)行分析處理。
-使用餾分收集器收集目標(biāo)化合物，根據(jù)時間編程或檢測器信號強(qiáng)度自動觸發(fā)收集。
-對收集到的餾分進(jìn)行進(jìn)一步分析和鑒定，如純度檢測、結(jié)構(gòu)確認(rèn)等。
